SUMMARY OF PM6 CALCULATION MOPAC2007 (Version: 8.178W) Tue Jul 1 14:00:55 2008 Empirical Formula: C1134 H1917 N293 O433 S2 Se4 = 3783 atoms Mozyme t=7w start_res=(2 66) cvb(471:-467;488:-478) chains=(AAaa) gnorm=10 PASSWORD=324401055 beta_barrel_(1EMA) HERBERTS TEST WAS SATISFIED IN BFGS SCF FIELD WAS ACHIEVED HEAT OF FORMATION = -23063.36454 KCAL = -96497.11725 KJ TOTAL ENERGY = -344986.24202 EV ELECTRONIC ENERGY = -46168824.53912 EV CORE-CORE REPULSION = 45823838.29710 EV GRADIENT NORM = 9.90100 DIPOLE = 76.70750 DEBYE NO. OF FILLED LEVELS = 5276 MOLECULAR WEIGHT = 26964.282 MOLECULAR DIMENSIONS (Angstroms) Atom Atom Distance H 2450 H 3440 53.09960 O 997 H 3723 47.69442 H 3154 O 1474 44.82001 SCF CALCULATIONS = 50 COMPUTATION TIME = 9 HOURS 57 MINUTES AND 16.750 SECONDS FINAL GEOMETRY OBTAINED CHARGE *HEADER FLUORESCENT PROTEIN 01-AUG-96 1EMA *TITLE GREEN FLUORESCENT PROTEIN FROM AEQUOREA VICTORIA *COMPND MOL_ID: 1; *COMPND 2 MOLECULE: GREEN FLUORESCENT PROTEIN; *COMPND 3 CHAIN: A; *COMPND 4 ENGINEERED: YES; *COMPND 5 MUTATION: YES; *COMPND 6 OTHER_DETAILS: THE PROTEIN CONTAINS SIX SE-METHIONINES. OF *COMPND 7 THESE, THE N-TERMINAL MET AND MET 233 ARE NOT PRESENT IN *COMPND 8 THE ENTRY *SOURCE MOL_ID: 1; *SOURCE 2 ORGANISM_SCIENTIFIC: AEQUOREA VICTORIA; *SOURCE 3 ORGANISM_COMMON: JELLYFISH; *SOURCE 4 ORGAN: LEAVES; *SOURCE 5 EXPRESSION_SYSTEM: ESCHERICHIA COLI; *SOURCE 6 EXPRESSION_SYSTEM_STRAIN: JM109 (DE3); *SOURCE 7 EXPRESSION_SYSTEM_PLASMID: PRSETB (INVITROGEN); *SOURCE 8 OTHER_DETAILS: THE N-TERMINAL HIS-TAG HAS BEEN REMOVED *KEYWDS BETA-BARREL, AUTOCATALYTIC, FLUOROPHORE, BIOLUMINESCENSE *KEYWDS 2 FLUORESCENT PROTEIN *EXPDTA X-RAY DIFFRACTION *AUTHOR M.ORMO,S.J.REMINGTON *REVDAT 1 08-NOV-96 1EMA 0 *JRNL AUTH M.ORMO,A.B.CUBITT,K.KALLIO,L.A.GROSS,R.Y.TSIEN, *JRNL AUTH 2 S.J.REMINGTON *JRNL TITL CRYSTAL STRUCTURE OF THE AEQUOREA VICTORIA GREEN *JRNL TITL 2 FLUORESCENT PROTEIN. *JRNL REF SCIENCE V. 273 1392 1996 *JRNL REFN ASTM SCIEAS US ISSN 0036-8075 *REMARK 1 *REMARK 1 REFERENCE 1 *REMARK 1 AUTH R.HEIM,A.B.CUBITT,R.Y.TSIEN *REMARK 1 TITL IMPROVED GREEN FLUORESCENCE *REMARK 1 REF NATURE V. 373 663 1995 *REMARK 1 REFN ASTM NATUAS UK ISSN 0028-0836 *REMARK 2 *REMARK 2 RESOLUTION. 1.90 ANGSTROMS. *REMARK 3 *REMARK 3 REFINEMENT. *REMARK 3 PROGRAM : TNT V. 5-F *REMARK 3 AUTHORS : TRONRUD,TEN EYCK,MATTHEWS *REMARK 3 *REMARK 3 DATA USED IN REFINEMENT. *REMARK 3 RESOLUTION RANGE HIGH (ANGSTROMS) : 1.90 *REMARK 3 RESOLUTION RANGE LOW (ANGSTROMS) : 20.00 *REMARK 3 DATA CUTOFF (SIGMA(F)) : 0.000 *REMARK 3 COMPLETENESS FOR RANGE (%) : 84.0 *REMARK 3 NUMBER OF REFLECTIONS : 17676 *REMARK 3 *REMARK 3 USING DATA ABOVE SIGMA CUTOFF. *REMARK 3 CROSS-VALIDATION METHOD :NULL *REMARK 3 FREE R VALUE TEST SET SELECTION :NULL *REMARK 3 R VALUE (WORKING + TEST SET) :NULL *REMARK 3 R VALUE (WORKING SET) :NULL *REMARK 3 FREE R VALUE :NULL *REMARK 3 FREE R VALUE TEST SET SIZE (%) :NULL *REMARK 3 FREE R VALUE TEST SET COUNT :NULL *REMARK 3 *REMARK 3 USING ALL DATA, NO SIGMA CUTOFF. *REMARK 3 R VALUE (WORKING + TEST SET, NO CUTOFF) : NULL *REMARK 3 R VALUE (WORKING SET, NO CUTOFF) : 0.1750 *REMARK 3 FREE R VALUE (NO CUTOFF) : NULL *REMARK 3 FREE R VALUE TEST SET SIZE (%, NO CUTOFF) : NULL *REMARK 3 FREE R VALUE TEST SET COUNT (NO CUTOFF) : NULL *REMARK 3 TOTAL NUMBER OF REFLECTIONS (NO CUTOFF) : NULL *REMARK 3 *REMARK 3 NUMBER OF NON-HYDROGEN ATOMS USED IN REFINEMENT. *REMARK 3 PROTEIN ATOMS : 1771 *REMARK 3 NUCLEIC ACID ATOMS : 0 *REMARK 3 HETEROGEN ATOMS : 0 *REMARK 3 SOLVENT ATOMS : 95 *REMARK 3 *REMARK 3 WILSON B VALUE (FROM FCALC, A**2) : 16.500 *REMARK 3 *REMARK 3 RMS DEVIATIONS FROM IDEAL VALUES. RMS WEIGHT COUNT *REMARK 3 BOND LENGTHS (A) : 0.014 ; 1.300 ; 1815 *REMARK 3 BOND ANGLES (DEGREES) : 1.950 ; 4.400 ; 2453 *REMARK 3 TORSION ANGLES (DEGREES) : 19.650; 0.000 ; 1050 *REMARK 3 PSEUDOROTATION ANGLES (DEGREES) : NULL ; NULL ; NULL *REMARK 3 TRIGONAL CARBON PLANES (A) : 0.014 ; 2.000 ; 47 *REMARK 3 GENERAL PLANES (A) : 0.018 ; 8.500 ; 264 *REMARK 3 ISOTROPIC THERMAL FACTORS (A**2) : 4.290 ; 2.400 ; 1771 *REMARK 3 NON-BONDED CONTACTS (A) : 0.041 ; 10.000; 13 *REMARK 3 *REMARK 3 INCORRECT CHIRAL-CENTERS (COUNT) : NULL *REMARK 3 *REMARK 3 BULK SOLVENT MODELING. *REMARK 3 METHOD USED : BABINET SCALING *REMARK 3 KSOL : 0.80 *REMARK 3 BSOL : 300.00 *REMARK 3 *REMARK 3 RESTRAINT LIBRARIES. *REMARK 3 STEREOCHEMISTRY : TNT *REMARK 3 ISOTROPIC THERMAL FACTOR RESTRAINTS : TNT *REMARK 3 *REMARK 3 OTHER REFINEMENT REMARKS: NULL *REMARK 4 *REMARK 4 1EMA COMPLIES WITH FORMAT V. 3.0, 1-DEC-2006 *REMARK 4 *REMARK 4 THIS IS THE REMEDIATED VERSION OF THIS PDB ENTRY. *REMARK 4 REMEDIATED DATA FILE REVISION 3.101 (2007-05-29) *REMARK 200 *REMARK 200 EXPERIMENTAL DETAILS *REMARK 200 EXPERIMENT TYPE : X-RAY DIFFRACTION *REMARK 200 DATE OF DATA COLLECTION : 28-APR-1996 *REMARK 200 TEMPERATURE (KELVIN) : 295.0 *REMARK 200 PH : 8.00 *REMARK 200 NUMBER OF CRYSTALS USED : 1 *REMARK 200 *REMARK 200 SYNCHROTRON (Y/N) : Y *REMARK 200 RADIATION SOURCE : NSLS *REMARK 200 BEAMLINE : X4A *REMARK 200 X-RAY GENERATOR MODEL : NULL *REMARK 200 MONOCHROMATIC OR LAUE (M/L) : M *REMARK 200 WAVELENGTH OR RANGE (A) : 0.979 *REMARK 200 MONOCHROMATOR : NULL *REMARK 200 OPTICS : NULL *REMARK 200 *REMARK 200 DETECTOR TYPE : IMAGE PLATE AREA DETECTOR *REMARK 200 DETECTOR MANUFACTURER : FUJI FILM *REMARK 200 INTENSITY-INTEGRATION SOFTWARE : HKL *REMARK 200 DATA SCALING SOFTWARE : HKL *REMARK 200 *REMARK 200 NUMBER OF UNIQUE REFLECTIONS : 17676 *REMARK 200 RESOLUTION RANGE HIGH (A) : 1.900 *REMARK 200 RESOLUTION RANGE LOW (A) : NULL *REMARK 200 REJECTION CRITERIA (SIGMA(I)) : 0.000 *REMARK 200 *REMARK 200 OVERALL. *REMARK 200 COMPLETENESS FOR RANGE (%) : 84.0 *REMARK 200 DATA REDUNDANCY : 6.450 *REMARK 200 R MERGE (I) : 0.09000 *REMARK 200 R SYM (I) : NULL *REMARK 200 FOR THE DATA SET : NULL *REMARK 200 *REMARK 200 IN THE HIGHEST RESOLUTION SHELL. *REMARK 200 HIGHEST RESOLUTION SHELL, RANGE HIGH (A) : NULL *REMARK 200 HIGHEST RESOLUTION SHELL, RANGE LOW (A) : NULL *REMARK 200 COMPLETENESS FOR SHELL (%) : NULL *REMARK 200 DATA REDUNDANCY IN SHELL : NULL *REMARK 200 R MERGE FOR SHELL (I) : NULL *REMARK 200 R SYM FOR SHELL (I) : NULL *REMARK 200 FOR SHELL : NULL *REMARK 200 *REMARK 200 DIFFRACTION PROTOCOL: NULL *REMARK 200 METHOD USED TO DETERMINE THE STRUCTURE: MIR/SAD *REMARK 200 SOFTWARE USED: CCP4, PROTEIN *REMARK 200 STARTING MODEL: NULL *REMARK 200 *REMARK 200 REMARK: NULL *REMARK 280 *REMARK 280 CRYSTAL *REMARK 280 SOLVENT CONTENT, VS (%): 40.50 *REMARK 280 MATTHEWS COEFFICIENT, VM (ANGSTROMS**3/DA): 2.10 *REMARK 280 *REMARK 280 CRYSTALLIZATION CONDITIONS: 22-26% PEG 4000, 50 MM HEPES PH *REMARK 280 8.0-8.4, 50 MM MGCL2, 10 MM 2-MERCAPTOETHANOL, 5-7 MG PROTEIN, *REMARK 280 PH 8.2 *REMARK 290 *REMARK 290 CRYSTALLOGRAPHIC SYMMETRY *REMARK 290 SYMMETRY OPERATORS FOR SPACE GROUP: P 21 21 21 *REMARK 290 *REMARK 290 SYMOP SYMMETRY *REMARK 290 NNNMMM OPERATOR *REMARK 290 1555 X,Y,Z *REMARK 290 2555 1/2-X,-Y,1/2+Z *REMARK 290 3555 -X,1/2+Y,1/2-Z *REMARK 290 4555 1/2+X,1/2-Y,-Z *REMARK 290 *REMARK 290 WHERE NNN -> OPERATOR NUMBER *REMARK 290 MMM -> TRANSLATION VECTOR *REMARK 290 *REMARK 290 CRYSTALLOGRAPHIC SYMMETRY TRANSFORMATIONS *REMARK 290 THE FOLLOWING TRANSFORMATIONS OPERATE ON THE ATOM/HETATM *REMARK 290 RECORDS IN THIS ENTRY TO PRODUCE CRYSTALLOGRAPHICALLY *REMARK 290 RELATED MOLECULES. *REMARK 290 SMTRY1 1 1.000000 0.000000 0.000000 0.00000 *REMARK 290 SMTRY2 1 0.000000 1.000000 0.000000 0.00000 *REMARK 290 SMTRY3 1 0.000000 0.000000 1.000000 0.00000 *REMARK 290 SMTRY1 2 -1.000000 0.000000 0.000000 25.88500 *REMARK 290 SMTRY2 2 0.000000 -1.000000 0.000000 0.00000 *REMARK 290 SMTRY3 2 0.000000 0.000000 1.000000 35.33500 *REMARK 290 SMTRY1 3 -1.000000 0.000000 0.000000 0.00000 *REMARK 290 SMTRY2 3 0.000000 1.000000 0.000000 31.42500 *REMARK 290 SMTRY3 3 0.000000 0.000000 -1.000000 35.33500 *REMARK 290 SMTRY1 4 1.000000 0.000000 0.000000 25.88500 *REMARK 290 SMTRY2 4 0.000000 -1.000000 0.000000 31.42500 *REMARK 290 SMTRY3 4 0.000000 0.000000 -1.000000 0.00000 *REMARK 290 *REMARK 290 REMARK: NULL *REMARK 300 *REMARK 300 BIOMOLECULE: 1 *REMARK 300 THIS ENTRY CONTAINS THE CRYSTALLOGRAPHIC ASYMMETRIC UNIT *REMARK 300 WHICH CONSISTS OF 1 CHAIN(S). SEE REMARK 350 FOR *REMARK 300 INFORMATION ON GENERATING THE BIOLOGICAL MOLECULE(S). *REMARK 350 *REMARK 350 GENERATING THE BIOMOLECULE *REMARK 350 COORDINATES FOR A COMPLETE MULTIMER REPRESENTING THE KNOWN *REMARK 350 BIOLOGICALLY SIGNIFICANT OLIGOMERIZATION STATE OF THE *REMARK 350 MOLECULE CAN BE GENERATED BY APPLYING BIOMT TRANSFORMATIONS *REMARK 350 GIVEN BELOW. BOTH NON-CRYSTALLOGRAPHIC AND *REMARK 350 CRYSTALLOGRAPHIC OPERATIONS ARE GIVEN. *REMARK 350 *REMARK 350 BIOMOLECULE: 1 *REMARK 350 APPLY THE FOLLOWING TO CHAINS: A *REMARK 350 BIOMT1 1 1.000000 0.000000 0.000000 0.00000 *REMARK 350 BIOMT2 1 0.000000 1.000000 0.000000 0.00000 *REMARK 350 BIOMT3 1 0.000000 0.000000 1.000000 0.00000 *REMARK 465 *REMARK 465 MISSING RESIDUES *REMARK 465 THE FOLLOWING RESIDUES WERE NOT LOCATED IN THE *REMARK 465 EXPERIMENT. (M=MODEL NUMBER; RES=RESIDUE NAME; C=CHAIN *REMARK 465 IDENTIFIER; SSSEQ=SEQUENCE NUMBER; I=INSERTION CODE.) *REMARK 465 *REMARK 465 M RES C SSSEQI *REMARK 465 MSE A 1 *REMARK 465 THR A 230 *REMARK 465 HIS A 231 *REMARK 465 GLY A 232 *REMARK 465 MSE A 233 *REMARK 465 ASP A 234 *REMARK 465 GLU A 235 *REMARK 465 LEU A 236 *REMARK 465 TYR A 237 *REMARK 465 LYS A 238 *REMARK 470 *REMARK 470 MISSING ATOM *REMARK 470 THE FOLLOWING RESIDUES HAVE MISSING ATOMS(M=MODEL NUMBER; *REMARK 470 RES=RESIDUE NAME; C=CHAIN IDENTIFIER; SSEQ=SEQUENCE NUMBER; *REMARK 470 I=INSERTION CODE): *REMARK 470 M RES CSSEQI ATOMS *REMARK 470 GLU A 6 CD OE1 OE2 *REMARK 470 LYS A 26 NZ *REMARK 470 LYS A 52 CD CE NZ *REMARK 470 LYS A 101 NZ *REMARK 470 LYS A 107 CE NZ *REMARK 470 ARG A 122 NE CZ NH1 NH2 *REMARK 470 GLU A 124 CD OE1 OE2 *REMARK 470 LYS A 131 CE NZ *REMARK 470 GLU A 132 CG CD OE1 OE2 *REMARK 470 LYS A 156 CG CD CE NZ *REMARK 470 GLN A 157 CB CG CD OE1 NE2 *REMARK 470 LYS A 158 CB CG CD CE NZ *REMARK 470 LYS A 162 CE NZ *REMARK 470 ASN A 212 OD1 ND2 *REMARK 470 LYS A 214 CE NZ *DBREF 1EMA A 2 238 UNP P42212 GFP_AEQVI 3 239 *SEQADV 1EMA CRO A 66 UNP P42212 SER 66 POST-TRANSLATIONAL *SEQADV 1EMA CRO A 66 UNP P42212 TYR 67 POST-TRANSLATIONAL *SEQADV 1EMA CRO A 66 UNP P42212 GLY 68 POST-TRANSLATIONAL *SEQADV 1EMA MSE A 78 UNP P42212 MET 79 ENGINEERED *SEQADV 1EMA MSE A 88 UNP P42212 MET 89 ENGINEERED *SEQADV 1EMA MSE A 153 UNP P42212 MET 154 ENGINEERED *SEQADV 1EMA MSE A 218 UNP P42212 MET 219 ENGINEERED *SEQADV 1EMA MSE A 233 UNP P42212 MET 234 CONFLICT *SEQRES 1 A 236 MSE SER LYS GLY GLU GLU LEU PHE THR GLY VAL VAL PRO *SEQRES 2 A 236 ILE LEU VAL GLU LEU ASP GLY ASP VAL ASN GLY HIS LYS *SEQRES 3 A 236 PHE SER VAL SER GLY GLU GLY GLU GLY ASP ALA THR TYR *SEQRES 4 A 236 GLY LYS LEU THR LEU LYS PHE ILE CYS THR THR GLY LYS *SEQRES 5 A 236 LEU PRO VAL PRO TRP PRO THR LEU VAL THR THR PHE CRO *SEQRES 6 A 236 VAL GLN CYS PHE SER ARG TYR PRO ASP HIS MSE LYS ARG *SEQRES 7 A 236 HIS ASP PHE PHE LYS SER ALA MSE PRO GLU GLY TYR VAL *SEQRES 8 A 236 GLN GLU ARG THR ILE PHE PHE LYS ASP ASP GLY ASN TYR *SEQRES 9 A 236 LYS THR ARG ALA GLU VAL LYS PHE GLU GLY ASP THR LEU *SEQRES 10 A 236 VAL ASN ARG ILE GLU LEU LYS GLY ILE ASP PHE LYS GLU *SEQRES 11 A 236 ASP GLY ASN ILE LEU GLY HIS LYS LEU GLU TYR ASN TYR *SEQRES 12 A 236 ASN SER HIS ASN VAL TYR ILE MSE ALA ASP LYS GLN LYS *SEQRES 13 A 236 ASN GLY ILE LYS VAL ASN PHE LYS ILE ARG HIS ASN ILE *SEQRES 14 A 236 GLU ASP GLY SER VAL GLN LEU ALA ASP HIS TYR GLN GLN *SEQRES 15 A 236 ASN THR PRO ILE GLY ASP GLY PRO VAL LEU LEU PRO ASP *SEQRES 16 A 236 ASN HIS TYR LEU SER THR GLN SER ALA LEU SER LYS ASP *SEQRES 17 A 236 PRO ASN GLU LYS ARG ASP HIS MSE VAL LEU LEU GLU PHE *SEQRES 18 A 236 VAL THR ALA ALA GLY ILE THR HIS GLY MSE ASP GLU LEU *SEQRES 19 A 236 TYR LYS *MODRES 1EMA CRO A 66 GLY *MODRES 1EMA MSE A 78 MET SELENOMETHIONINE *MODRES 1EMA MSE A 88 MET SELENOMETHIONINE *MODRES 1EMA MSE A 153 MET SELENOMETHIONINE *MODRES 1EMA MSE A 218 MET SELENOMETHIONINE *MODRES 1EMA CRO A 66 TYR *HET CRO A 66 22 *HET MSE A 78 8 *HET MSE A 88 8 *HET MSE A 153 8 *HET MSE A 218 8 *HETNAM CRO [2-(1-AMINO-2-HYDROXY-PROPYL)-4-(4-HYDROXY- *HETNAM 2 CRO BENZYLIDINE)-5-OXO-4,5-DIHYDRO-IMIDAZOL-1-YL]- *HETNAM 3 CRO ACETALDEHYDE *HETNAM MSE SELENOMETHIONINE *HETSYN CRO PEPTIDE DERIVED CHROMOPHORE *FORMUL 1 CRO C15 H17 N3 O4 *FORMUL 1 MSE 4(C5 H11 N O2 SE) *FORMUL 2 HOH *95(H2 O) *HELIX 1 1 GLY A 4 PHE A 8 5 5 *HELIX 2 2 TRP A 57 LEU A 60 1 4 *HELIX 3 3 GLN A 69 PHE A 71 5 3 *HELIX 4 4 PHE A 83 SER A 86 1 4 *SHEET 1 A11 GLY A 160 ASN A 170 0 *SHEET 2 A11 VAL A 176 PRO A 187 -1 N ASN A 185 O ILE A 161 *SHEET 3 A11 TYR A 92 PHE A 100 -1 N PHE A 99 O ASP A 180 *SHEET 4 A11 ASN A 105 GLU A 115 -1 N VAL A 112 O TYR A 92 *SHEET 5 A11 THR A 118 ILE A 128 -1 N ILE A 128 O ASN A 105 *SHEET 6 A11 VAL A 12 VAL A 22 1 N LEU A 15 O LEU A 119 *SHEET 7 A11 HIS A 25 ASP A 36 -1 N GLY A 35 O VAL A 12 *SHEET 8 A11 LYS A 41 CYS A 48 -1 N ILE A 47 O SER A 30 *SHEET 9 A11 LEU A 220 ALA A 227 -1 N GLU A 222 O LEU A 42 *SHEET 10 A11 HIS A 199 LEU A 207 -1 N ALA A 206 O LEU A 221 *SHEET 11 A11 HIS A 148 ILE A 152 -1 N ILE A 152 O HIS A 199 *LINK N1 CRO A 66 C PHE A 64 *LINK C3 CRO A 66 N VAL A 68 *LINK N MSE A 78 C HIS A 77 *LINK C MSE A 78 N LYS A 79 *LINK N MSE A 88 C ALA A 87 *LINK C MSE A 88 N PRO A 89 *LINK N MSE A 153 C ILE A 152 *LINK C MSE A 153 N ALA A 154 *LINK N MSE A 218 C HIS A 217 *LINK C MSE A 218 N VAL A 219 *CISPEP 1 MSE A 88 PRO A 89 0 3.15 *CRYST1 51.770 62.850 70.670 90.00 90.00 90.00 P 21 21 21 4 *ORIGX1 1.000000 0.000000 0.000000 0.00000 *ORIGX2 0.000000 1.000000 0.000000 0.00000 *ORIGX3 0.000000 0.000000 1.000000 0.00000 *SCALE1 0.019316 0.000000 0.000000 0.00000 *SCALE2 0.000000 0.015911 0.000000 0.00000 *SCALE3 0.000000 0.000000 0.014150 0.00000 Mozyme t=7w start_res=(2 66) cvb(471:-467;488:-478) chains=(AAaa) gnorm=10 PASSWORD=324401055 beta_barrel_(1EMA) N 28.72862347 +1 10.5954126 +1 52.1451872 +1 -0.4975 C 27.35772694 +1 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